Môi trường MS (Murashige & Skoog): thành phần và cách pha
Môi trường MS (1962) là công thức nền được dùng nhiều nhất trong nuôi cấy mô thực vật. Dưới đây là thành phần chuẩn cho 1 lít và quy trình pha tham khảo.
Thành phần môi trường MS cho 1 lít
| Thành phần | Nồng độ |
|---|---|
| Khoáng đa lượng | |
| NH₄NO₃ | 1.650 mg/L |
| KNO₃ | 1.900 mg/L |
| CaCl₂·2H₂O | 440 mg/L |
| MgSO₄·7H₂O | 370 mg/L |
| KH₂PO₄ | 170 mg/L |
| Vi lượng | |
| H₃BO₃ | 6,2 mg/L |
| MnSO₄·4H₂O | 22,3 mg/L |
| ZnSO₄·7H₂O | 8,6 mg/L |
| KI | 0,83 mg/L |
| Na₂MoO₄·2H₂O | 0,25 mg/L |
| CuSO₄·5H₂O | 0,025 mg/L |
| CoCl₂·6H₂O | 0,025 mg/L |
| Sắt chelate | |
| FeSO₄·7H₂O | 27,8 mg/L |
| Na₂EDTA·2H₂O | 37,3 mg/L |
| Vitamin và hữu cơ | |
| Myo-inositol | 100 mg/L |
| Acid nicotinic | 0,5 mg/L |
| Pyridoxine-HCl (B6) | 0,5 mg/L |
| Thiamine-HCl (B1) | 0,1 mg/L |
| Glycine | 2 mg/L |
| Bổ sung thường dùng | |
| Sucrose | 30 g/L |
| Agar | 6–8 g/L |
| pH | 5,7–5,8 (trước khi hấp) |
Các hóa chất có liên kết là sản phẩm Hóa Sinh đang cung cấp.
Cách pha 1 lít môi trường MS
- Đong khoảng 700–800 mL nước cất vào cốc có máy khuấy.
- Thêm lần lượt dung dịch mẹ đa lượng, vi lượng, Fe-EDTA và vitamin theo thể tích tương ứng.
- Thêm sucrose 30 g, khuấy tan; bổ sung chất điều hòa sinh trưởng theo công thức (ví dụ 6-BAP).
- Định mức đến 1 L, chỉnh pH 5,7–5,8 bằng NaOH hoặc HCl loãng.
- Thêm agar 6–8 g, đun cho tan hoàn toàn.
- Rót vào bình nuôi cấy, hấp 121 °C trong 15–20 phút, để nguội và đông thạch.
Hóa chất nuôi cấy mô liên quan
CaCl₂Calcium chlorideCanxi cho thành tế bàoMS: 440 mg/L (·2H₂O)MgSO₄Magnesium sulphateMagie và lưu huỳnhMS: 370 mg/L (·7H₂O)FeSO₄Iron (II) sulphateNguồn sắtMS: 27,8 mg/L (·7H₂O)C₁₀H₁₄N₂Na₂O₈EDTA·2NaGiữ sắt ở dạng hòa tanMS: 37,3 mg/L (·2H₂O)C₂H₅NO₂GlycineĐạm hữu cơMS: 2 mg/LC₁₂H₁₁N₅6-Benzylaminopurine (6-BAP)Tạo và nhân chồi0,5–2 mg/L(C₁₂H₁₈O₉)ₙAgarGiá thể gel6–8 g/L
Câu hỏi thường gặp
Môi trường MS là gì?
Môi trường MS do Murashige và Skoog công bố năm 1962, là công thức dinh dưỡng phổ biến nhất trong nuôi cấy mô thực vật, gồm khoáng đa lượng, vi lượng, sắt chelate, vitamin và glycine.
Pha 1 lít môi trường MS cần bao nhiêu đường và agar?
Thông thường bổ sung sucrose 30 g/L và agar 6–8 g/L, chỉnh pH 5,7–5,8 trước khi hấp 121 °C trong 15–20 phút.
Có nên pha dung dịch mẹ cho môi trường MS?
Nên. Pha dung dịch mẹ đa lượng 10×–20×, vi lượng 100×–1000×, Fe-EDTA và vitamin riêng giúp cân chính xác, tiết kiệm thời gian và ổn định giữa các mẻ.